本文標(biāo)題："食品樣品細(xì)胞特征比表型特征分析顯微鏡"
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食品樣品細(xì)胞特征比表型特征分析顯微鏡
遺傳檢測(cè)
前已述及的快速微生物檢測(cè)和鑒定方法是基于微生物遺傳特性
所產(chǎn)生的表型。這些表型受生長(zhǎng)條件(如溫度、pH、營(yíng)養(yǎng)、氧化還
原電位、環(huán)境和化學(xué)壓力、有毒物質(zhì)以及水分活度等)的影響。基
于表型的分析方法(甚至包括免疫學(xué)檢測(cè))都依賴于微生物細(xì)胞產(chǎn)生
能被抗體識(shí)別的抗原或能被抗原識(shí)別的抗體。診斷微生物學(xué)中傳統(tǒng)
的“金標(biāo)法”依靠表型的表達(dá)或變異所產(chǎn)生的特征來(lái)檢測(cè)。
細(xì)胞的遺傳特征比表型特征穩(wěn)定得多。細(xì)菌的自發(fā)突變頻率約
為一億分之一。因此近年來(lái)遺傳檢測(cè)技術(shù)有所發(fā)展，成為診斷微生
物學(xué)中的確證環(huán)節(jié)。關(guān)于這方面的爭(zhēng)論還在繼續(xù)，監(jiān)管微生物檢測(cè)
的政府部門和法規(guī)制定機(jī)構(gòu)之間還沒(méi)有作出統(tǒng)一的決策。本節(jié)主要
討論基于遺傳檢測(cè)技術(shù)的診斷和鑒定系統(tǒng)。
遺傳檢測(cè)的第一個(gè)階段是采用已知的DNA探針與未知細(xì)菌的DNA
序列進(jìn)行雜交。Genetrak系統(tǒng)(Fμmingham, MA)提供了一種靈敏便
捷的方法來(lái)檢測(cè)食品中諸如沙門菌、李斯特菌、彎曲桿菌和大腸桿
菌0157等病原菌。最初，該系統(tǒng)采用標(biāo)記在DNA探針上的放射性同
位素來(lái)檢測(cè)未知培養(yǎng)物中的互補(bǔ)DNA。此類第一代探針的缺點(diǎn)有:①
大多數(shù)食品實(shí)驗(yàn)室不希望在常規(guī)分析中使用放射性物質(zhì);②一個(gè)細(xì)
胞內(nèi)的DNA拷貝數(shù)有限。第二代探針利用酶反應(yīng)來(lái)檢測(cè)病原菌，并
以RNA作為靶分子。一個(gè)細(xì)胞內(nèi)僅有一個(gè)完整的DNA拷貝，然而核糖
體RNA的拷貝數(shù)可能有1000一10000個(gè)。因此，新一代的探針采用顏
色反應(yīng)來(lái)檢測(cè)目標(biāo)RNA。對(duì)食品樣品中的細(xì)菌(如沙門菌)進(jìn)行約18h
的富集后，用去污劑將細(xì)胞(目標(biāo)細(xì)胞以及其他微生物)溶解以便胞
內(nèi)物質(zhì)(DNA, RNA及其他分子)釋放到溶液中。
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